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防污染探针法qPCR SuperMix引入dUTP/UDG防污染系统，可有效去除体系中存在的污染物，同时当反应体系升温至90～95℃，UDG酶彻底失活，可维持cDNA完整性。本制品是在PCR体系中添加荧光探针（TaqMan或Molecular Beacon等），在扩增过程中，其荧光量与扩增产物量成正比，通过荧光量来测定样品核酸量。本预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs等试剂预混在一起，是一种2×浓度的预混型试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。

本制品采用特殊工艺制备的热启动Taq DNA聚合酶并结合特别配方的反应缓冲液，能有效抑制非特异性反应，提高了反应特异性和扩增效率，能够在更广的范围内进行准确定量。并配有不同浓度的ROX Reference Dye，用于不同仪器校正孔间荧光信号误差。

• 高特异性：采用特殊工艺制备的HotStart Taq DNA聚合酶，大大提高了PCR扩增的特异性；
  
• 高效：精心配制的Real Time PCR专用2×SuperMix，具有更高扩增效率和扩增灵敏度；
  
• 快捷：PCR反应所必需试剂集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

• 使用时请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。
  
• 引物设计：一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应，扩增目标序列越短越好。一般为200bp以下。

• 常用反应体系
  

  成分	用量
  2×BalbStart Probe qPCR SuperMix(UDG)	10μL
  上游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  下游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  探针(10μM)	0.4μL
  模板	1～2μL
  ROX(需根据机器型号选择)	0.4μL
  RNase-Free Water	至20μL

• 推荐反应程序
  
  • 两步法扩增：
    

    循环数	温度	时间
    1	50℃	2min
    1	95℃	2min
    45～50	95℃	10s
    	60℃	40s

  • 三步法扩增：
    

    循环数	温度	时间
    1	50℃	2min
    1	95℃	2min
    45～50	95℃	10s
    	50～60℃	40s
    	72℃	30s

• 用ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI：5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast/StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI：7500/7500 Fast/ViiA7/QuantStudio 3,5,6 Flex,7 Flex,12k Flex；
  Stratagene：MX4000/MX3005P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad：CFX96/CFX384/iCycler iQ/iQ5/MyiQ/MiniOpticon/Opticon/Opticon2/Chromo4；
  Eppendorf：MasterCycler ep realplex/realplex 2s；
  Cepheid：SmartCycler；
  Illumina：Eco qPCR；
  Roche Applied Science：LightCycler480/LightCycler2.0/Lightcycler96；
  Thermo Scientific：PikoReal Cycler；
  Qiagen：Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。